נהלי תקינה של חדרים סטריליים ומפרטי קבלה

1. מטרה: נוהל זה נועד לספק נוהל סטנדרטי לפעולות אספטיות ולהגנה על חדרים סטריליים.

2. היקף היישום: מעבדת בדיקות ביולוגיות

3. אדם אחראי: מפקח בקרת איכות בודק

4. הגדרה: אין

5. אמצעי בטיחות

יש לבצע פעולות אספטיות בקפדנות כדי למנוע זיהום מיקרוביאלי; על המפעילים לכבות את מנורת ה-UV לפני הכניסה לחדר סטרילי.

6. נהלים

6.1. חדר סטרילי צריך להיות מצויד בחדר ניתוח סטרילי ובחדר חיץ. ניקיון חדר הניתוח הסטרילי צריך להגיע לדרגה 10000. יש לשמור על טמפרטורת פנים בטווח של 20-24 מעלות צלזיוס ועל לחות בטווח של 45-60%. ניקיון שולחן העבודה הנקי צריך להגיע לדרגה 100.

6.2. יש לשמור על ניקיון החדר הסטרילי, ואסור בהחלט לצבור פסולת כדי למנוע זיהום.

6.3. יש למנוע בקפדנות זיהום של כל ציוד העיקור ומצעי התרבית. אלו שזוהמו צריכים להפסיק להשתמש בהם.

6.4. יש לצייד את החדר הסטרילי בחומרי חיטוי בריכוז עבודה, כגון תמיסת קרסול 5%, אלכוהול 70%, תמיסת כלורמתיונין 0.1% וכו'.

6.5. יש לעקר ולנקות באופן קבוע את החדר הסטרילי באמצעות חומר חיטוי מתאים על מנת להבטיח כי ניקיון החדר הסטרילי עומד בדרישות.

6.6. כל המכשירים, הכלים, הכלים ופריטים אחרים שיש להכניס לחדר סטרילי צריכים להיות נעטפים היטב ועברו עיקור בשיטות מתאימות.

6.7. לפני הכניסה לחדר הסטרילי, על הצוות לשטוף את ידיו בסבון או בחומר חיטוי, ולאחר מכן להחליף לבגדי עבודה מיוחדים, נעליים, כובעים, מסכות וכפפות בחדר החיץ (או לנגב את ידיהם שוב עם אתנול 70%) לפני הכניסה לחדר הסטרילי. לבצע את הפעולות בתא חיידקים.

6.8. לפני השימוש בחדר הסטרילי, יש להפעיל את מנורת האולטרה סגול בחדר הסטרילי לצורך הקרנה ועיקור למשך יותר מ-30 דקות, ויש להפעיל את שולחן הניקוי בו זמנית לצורך נשיפה של אוויר. לאחר השלמת הפעולה, יש לנקות את החדר הסטרילי בזמן ולאחר מכן לעקר אותו באור אולטרה סגול למשך 20 דקות.

6.9. לפני הבדיקה, יש לשמור על האריזה החיצונית של דגימת הבדיקה שלמה ואין לפתוח אותה כדי למנוע זיהום. לפני הבדיקה, יש להשתמש בכדורי צמר גפן עם אלכוהול 70% כדי לחטא את המשטח החיצוני.

6.10. במהלך כל פעולה, יש לבצע בקרה שלילית כדי לבדוק את אמינות הפעולה האספטית.

6.11. בעת ספיגת נוזל חיידקי, יש להשתמש בכדור יניקה כדי לספוג אותו. אין לגעת בקשית ישירות עם הפה.

6.12. יש לעקר את מחט ההדבקה בלהבה לפני ואחרי כל שימוש. לאחר הקירור, ניתן להחדיר את התרבית.

6.13. יש להשרות את הקשיות, מבחנות, צלחות פטרי וכלים אחרים המכילים נוזל חיידקי בדלי עיקור המכיל תמיסת ליזול 5% לחיטוי, ולהוציא ולשטוף לאחר 24 שעות.

6.14. אם נשפך נוזל חיידקי על שולחן או רצפה, יש לשפוך מיד תמיסת חומצה קרבולית 5% או ליזול 3% על האזור המזוהם למשך 30 דקות לפחות לפני הטיפול בו. כאשר בגדי עבודה וכובעים מזוהמים בנוזל חיידקי, יש להסירם מיד ולכבסם לאחר עיקור בקיטור בלחץ גבוה.

6.15. יש לחטא את כל הפריטים המכילים חיידקים חיים לפני שטיפתם תחת הברז. חל איסור מוחלט לזהם את הביוב.

6.16. יש לבדוק את מספר המושבות בחדר הסטרילי מדי חודש. כאשר שולחן העבודה הנקי פתוח, קחו מספר צלחות פטרי סטריליות בקוטר פנימי של 90 מ"מ, והזריקו באופן אספטי כ-15 מ"ל של מצע תרבית אגר מזין שהותך וקורר לכ-45 מעלות צלזיוס. לאחר התמצקות, הניחו אותן הפוכה בטמפרטורה של 30 עד 35 מעלות צלזיוס. דגרו במשך 48 שעות באינקובטור של מעלות צלזיוס. לאחר הוכחת סטריליות, קחו 3 עד 5 צלחות והניחו אותן בצד שמאל, באמצע ובימין של עמדת העבודה. לאחר פתיחת המכסה וחשיפתן למשך 30 דקות, הניחו אותן הפוכה באינקובטור של 30 עד 35 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות והוציאו אותן. בדיקה. מספר החיידקים השונים הממוצע בצלחת באזור נקי מסוג 100 לא יעלה על מושבה אחת, והמספר הממוצע בחדר נקי מסוג 10000 לא יעלה על 3 מושבות. אם חורגים מהמגבלה, יש לחטא היטב את החדר הסטרילי עד לבדיקות חוזרות ועומדות בדרישות.

7. עיינו בפרק (שיטת בדיקת סטריליות) ב"שיטות בדיקה היגיינית של תרופות" וב"נהלי הפעלה סטנדרטיים של סין לבדיקת תרופות".

8. מחלקת הפצה: מחלקת ניהול איכות

הדרכה טכנית לחדר נקי:

לאחר השגת סביבה סטרילית וחומרים סטריליים, עלינו לשמור על מצב סטרילי על מנת לחקור מיקרואורגניזם ידוע ספציפי או לנצל את תפקידיו. אחרת, מיקרואורגניזמים שונים מבחוץ עלולים להתערבב בקלות. תופעת הערבוב של מיקרואורגניזמים לא רלוונטיים מבחוץ נקראת חיידקים מזהמים במיקרוביולוגיה. מניעת זיהום היא טכניקה קריטית בעבודה מיקרוביולוגית. עיקור מלא מצד אחד ומניעת זיהום מצד שני הם שני היבטים של טכניקה אספטית. בנוסף, עלינו למנוע מהמיקרואורגניזמים הנחקרים, במיוחד מיקרואורגניזמים פתוגניים או מיקרואורגניזמים מהונדסים גנטית שאינם קיימים בטבע, לברוח ממיכלי הניסוי שלנו לסביבה החיצונית. למטרות אלה, במיקרוביולוגיה, ישנם אמצעים רבים.

חדר סטרילי הוא בדרך כלל חדר קטן שהוקם במיוחד במעבדת מיקרוביולוגיה. ניתן לבנות אותו מיריעות וזכוכית. השטח לא צריך להיות גדול מדי, כ-4-5 מטרים רבועים, והגובה צריך להיות כ-2.5 מטרים. יש להקים חדר חיץ מחוץ לחדר הסטרילי. דלת חדר החיץ ודלת חדר הסטרילי לא צריכות לפנות לאותו כיוון כדי למנוע מזרימת אוויר להכניס חיידקים שונים. גם חדר הסטרילי וגם חדר החיץ חייבים להיות אטומים לאטומים. ציוד אוורור פנימי חייב להיות מצויד במכשירי סינון אוויר. הרצפה והקירות של חדר הסטרילי חייבים להיות חלקים, קשים לנשיאת לכלוך וקלים לניקוי. משטח העבודה צריך להיות מאוזן. גם חדר הסטרילי וגם חדר החיץ מצוידים באורות אולטרה סגולים. אורות האולטרה סגולים בחדר הסטרילי נמצאים במרחק של מטר אחד ממשטח העבודה. צוות הנכנס לחדר הסטרילי צריך ללבוש בגדים וכובעים מעוקרים.

כיום, חדרים סטריליים קיימים בעיקר במפעלי מיקרוביולוגיה, בעוד שמעבדות כלליות משתמשות בשולחן עבודה נקי. הפונקציה העיקרית של שולחן העבודה הנקי היא להשתמש במכשיר זרימת אוויר למינרית כדי להסיר אבק זעיר, כולל מיקרואורגניזמים, ממשטח העבודה. המכשיר החשמלי מאפשר לאוויר לעבור דרך מסנן HEPA ואז להיכנס למשטח העבודה, כך שמשטח העבודה נשמר תמיד תחת שליטה של ​​אוויר סטרילי זורם. יתר על כן, ישנו וילון אוויר במהירות גבוהה בצד הקרוב לחוץ כדי למנוע כניסת אוויר חיידקי חיצוני.

במקומות עם תנאים קשים, ניתן להשתמש גם בקופסאות עץ סטריליות במקום ספסל נקי. לקופסה הסטרילית מבנה פשוט וקל להזזה. ישנם שני חורים בחזית הקופסה, אשר חסומים על ידי דלתות דחיפה-משיכה כאשר אינה בפעולה. ניתן לפרוש את הידיים פנימה במהלך הפעולה. החלק העליון של החזית מצויד בזכוכית כדי להקל על הפעולה הפנימית. בתוך הקופסה יש מנורת אולטרה סגולה, וניתן להכניס סכו"ם וחיידקים דרך דלת קטנה בצד.

טכניקות ניתוח אספטיות כיום לא רק ממלאות תפקיד מרכזי במחקר ויישומים מיקרוביולוגיים, אלא גם נמצאות בשימוש נרחב בביוטכנולוגיות רבות. לדוגמה, טכנולוגיה טרנסגנית, טכנולוגיית נוגדנים חד שבטיים וכו'.